迷你離心機提供多種功能和先進更換轉(zhuǎn)子的設(shè)計,性能可靠,操作簡單方便,僅需放好微量管,蓋上蓋子即啟動,轉(zhuǎn)速可以很快達到zui高轉(zhuǎn)速,其離心力均勻快速的施加到微量管的管帽和管壁上,特別適用于處理PCR管和微量過濾,快速從試管壁或試管蓋上甩下試劑,以及試管或排管的慢速離心。
想要通關(guān)蛋白表達少不了離心機。常言道細節(jié)決定成敗,尤其像蛋白表達提純這樣復(fù)雜的實驗。一個操作上的小失誤,可能直接影響結(jié)果。
雖然可以大致分為三步,表達、分離、純化,但是這個過程十分繁瑣。
蛋白表達前期還有一系列復(fù)雜過程,耗費時間也長,到后面一步,還不能放松警惕。
蛋白進行純化是通關(guān)的一步,選擇合適的純化方法,可以提高蛋白的純化效率,讓蛋白純化簡單便捷。常用的方法有:親和層析、離子交換層析、凝膠過濾層析、疏水層析等。
親和層析
親和層析純化是利用生物大分子物質(zhì)具有與某些相應(yīng)的分子專一性可逆結(jié)合的特性進行蛋白純化的技術(shù)。
離子交換層析
離子交換層析是一種依據(jù)蛋白表面所帶電荷量不同進行蛋白分離純化的技術(shù)。
凝膠過濾層析
凝膠過濾(也叫排阻層析或分子篩)是一種根據(jù)分子大小從混合物中分離蛋白質(zhì)的方法。
疏水作用層析
疏水作用層析是利用鹽-水體系中樣品分子的疏水基團和層析介質(zhì)的疏水配基之間疏水力的不同而進行分離的一種層析方法。
雖然方法多種多樣,但是,都需要用離心機來進行分離純化。
用脂肪氧合酶重組蛋白的誘導為例:
1.接種含有重組脂肪氧合酶蛋白的大腸桿菌BL21菌株于5 mL LB液體培養(yǎng)基中(含100 ug/mL 氨芐青霉素),37℃震蕩培養(yǎng)過夜。
2.按1∶50或1:100的比例稀釋過夜菌,一般轉(zhuǎn)接1 mL過夜培養(yǎng)物于100 mL(含100 ug/mL 氨芐青霉素)LB液體培養(yǎng)基中,37℃震蕩培養(yǎng)至OD600 = 0.6 - 0.8(*0.6,大約需3 h)。取10 ul 樣品用于SDS-PAGE 分析。
3.對照組不加誘導劑,實驗組加入IPTG至終濃度0.5 mmol/l,37℃繼續(xù)培養(yǎng)1-3h。
4.離心機12000 rpm 離心10 min,棄上清,菌體沉淀保存于-20℃或-70℃冰箱中。
以上就是關(guān)于蛋白表達的通關(guān)講解,本文重點就是要表達,一個實驗的成敗,細節(jié)很關(guān)鍵,雖然人工方面是可以人為把控的,但是輔助設(shè)備的細節(jié),還是要多加注意,選一臺合適的離心機很關(guān)鍵。